Ceinfinite spectrométrie de masse type rectiligne imagerie colonne entière isofocus icief

Ceinfinite spectrométrie de masse type rectiligne imagerie colonne entière isofocus icief

Ceinfinte spectrométrie de masse type rectiligne imagerie colonne entière isofocus icief

Plateforme de coupage en ligne CEInfinite iCIEF-MS

Dans le développement et la production de produits biologiques à base de protéines, en raison de modifications post - traductionnelles(PTM) et la dégradation, qui produit la charge de la protéine cibleHétérogèneLe corps. BiopharmaceutiquesentrepriseMise au point électrique dépendante des capillaires(CIEF) et imagerie CIEF (icief) pour quantifier les isomères de charge. La caractérisation des isomères de la charge biologique est utile à de nombreuses étapes du cycle de vie, y compris la sélection de lignées cellulaires, les études de stabilité, la formulation etLe processusContrôle, mais cette caractérisation nécessite la séparation de la protéine en une seule charge avec une pureté suffisanteFractions d'isomèresPour analyse en aval.

En outre, le couplage direct de l'icief avec le spectromètre de masse (MS) utilisé pour la caractérisation simplifiera considérablement le processus de caractérisation.

AES a développé le système icief de préparation ceinfinite et la colonne de séparation wcid (Full column Imaging Detection) exclusive pour la séparation et le couplage en ligne de l'icief - wcid avec MS, permettant l'observation en temps réel de la dynamique de la focalisation de séparation (icief) et du processus de migration des pics d'isomères de charge séparés ultérieurs. Pendant la migration sous pression, le champ électrique maintient l'échantillon dans le capillaire séparé focalisé. Le diamètre intérieur du capillaire de séparation est plus grand, tandis que celui du capillaire de transmission est plus petit. Cette différence de diamètre interne réduit donc considérablement la diffusion et le remélange des isomères protéiques isolés en sortie de colonne.

Présentation détaillée

Points forts de ceinfinite icief - MS

• Associez directement l'icief - MS aux ESI nanoflow classiques à faible débit ou à haute sensibilité de thermo Fisher Scientific, Waters et bruker.

• Tout tampon ou solution peut être utilisé comme liquide complémentaire. Aucune migration chimique n'est impliquée. Les variants de charge protéique sont introduits successivement dans la MS différemment selon pi.
  

• Le ce - MS peut être directement converti à partir de n'importe quelle méthode icief ou CIEF existante. Un bon degré de séparation est obtenu à des concentrations d'échantillon faibles et élevées.

Analyse icief - MS des échantillons de MAB NIST

Les profils des isomères de charge sont clairement observables avec l'icief - UV (rouge) et l'icief - MS (bleu) et d'excellents spectres MS de tous les pics variants ont été obtenus, ce qui nous permet de déconvoluer la plupart des variantes complètes de charge MAB NIST.

Les résultats montrent que les pics alcalins B1 et B2 résultent principalement de l'isomérisation de la lysine C - terminale et que le pic acide A1 a un poids moléculaire qui diffère moins du pic principal, probablement en raison de modifications telles que la désamidification, nécessitant des recherches et une confirmation supplémentaires par la préparation de l'icief.

Évaluations des clients:

« leL'icief joue un rôle essentiel dans la surveillance des variations de charge au cours du développement biopharmaceutique. Ceinfinite nous permet d'obtenir des lectures de qualité des variants de produits détectés par l'icief, ce qui est très utile pour comprendre la chimie des variants de charge. En combinant ceinfinite avec la spectrométrie de masse précise haute résolution fournie par le système orbitrap MS, une compréhension détaillée des variantes et de la stabilité du produit peut être obtenue.

En bref, icief - MS avec ceinfinite est un outil de caractérisation très puissant dans le développement biopharmaceutique. "

- Dr Dan Bach Kristensen

Scientifique en chef symphogen